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核糖核酸酶保護實驗(RPA)基本原理

瀏覽次數: 日期:2017年2月15日 18:09

核糖核酸酶保護實驗(Ribonuclease protection assay,RPA)是近十年發展起來的一種全新的mRNA定量分析方法。其基本原理是將標記的特異RNA探針(32P或生物素)與待測的RNA樣品液相雜交,標記的特異RNA探針按堿基互補的原則與目的基因特異性結合,形成雙鏈RNA;未結合的單鏈RNA經RNA酶A或RNA酶T1消化形成寡核糖核酸,而待測目的基因與特異RNA探針結合后形成雙鏈RNA,免受RNA酶的消化,故該方法命名為RNA酶保護實驗。對于32P標記的探針,雜交雙鏈進行變性聚丙酰胺凝膠電泳,用放射自顯影或磷屏成像系統檢測被保護的探針的信號; 對于生物素標記的探針,雜交雙鏈經過變性聚丙酰胺凝膠電泳后電轉移至尼龍膜,采用鏈霉親和素-辣根過氧化物酶(Streptavidin-HRP)和化學發光底物與膜上biotin標記的探針結合,X射線膠片或化學發光圖像分析儀檢測雜交信號。

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